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親水作用色譜柱操作建議

更新時(shí)間:2025-04-11      點(diǎn)擊次數(shù):860

親水作用色譜柱操作建議(CORTECS HILIC、BEH HILIC、BEH Amide)

 

ACQUITY UPLC BEH 150MM.jpg


親水作用色譜柱的使用方法與反相色譜柱有很大的不同,需要加以注意。

 

1) 樣品制備

應(yīng)盡可能使用較高比例的有機(jī)溶劑(95%乙腈),以避免溶劑效應(yīng)。如果存在樣品溶解問(wèn)題,應(yīng)至少使用50/50乙腈/水,并減少進(jìn)樣體積。

 

2) 柱平衡

初次使用時(shí),先用50倍柱體積的50/50乙腈/(CORTECS HILIC,BEH HILIC,如果流動(dòng)相條件含有緩沖鹽則需添加10 mM流動(dòng)相緩沖鹽)60/40乙腈/(BEH Amide)對(duì)柱進(jìn)行老化;

開(kāi)始進(jìn)樣前,用20倍柱體積的起始流動(dòng)相條件進(jìn)行平衡;

如果使用梯度條件,每次梯度之間,用8-10倍柱體積的起始流動(dòng)相條件再次平衡。

沒(méi)有充分老化平衡的色譜柱,將會(huì)出現(xiàn)柱效較低、以及保留時(shí)間漂移的問(wèn)題。

 

3) 柱清洗再生

對(duì)于ACQUITY UPLC BEH HILICCORTECS HILIC色譜柱,用50/50乙腈/水清洗以去除極性污染物。如果不能解決問(wèn)題,用5/95的乙腈/水沖洗;

對(duì)于ACQUITY UPLC Amide色譜柱,可采用10分鐘的梯度洗脫從100%有機(jī)相到100%水相。值得注意的是當(dāng)水相比例升高,壓力將迅速增加,當(dāng)水相比例超過(guò)60%時(shí)需降低流速。如果有必要可重復(fù)清洗。

 

4) 柱保存

先將緩沖鹽從色譜柱內(nèi)沖洗干凈,然后將色譜柱保存在95/5乙腈/(BEH HILIC,CORTECS HILIC)100%乙腈(BEH Amide)中。


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